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          如何在酶解DNA時(shí)保護好你的RNA

          作者:Michelle Tetreault Carlson 來(lái)源:美國MoBio實(shí)驗室【字號:

          核酸提取過(guò)程中DNA酶解步驟是引起RNA降解或丟失的最常見(jiàn)原因之一。酶解反應一般在硅膠離心柱上進(jìn)行,這對離心柱式核酸提取來(lái)說(shuō)是一種節省時(shí)間的好方法,但對富含DNA的樣品而言就不那么有效率了(比如脾臟,胸腺,甚至某些土壤樣品),這種情況下,需要在溶液中對DNA進(jìn)行酶解。

          經(jīng)典的DNA酶解程序最后一步涉及加EDTA或者加熱滅活酶,這兩種方式都會(huì )影響RT-PCR結果:EDTA會(huì )抑制RT-PCR酶的活性,加熱會(huì )導致RNA完整性受損。另外,大部分DNA酶需要冷凍保存并且多管分裝以避免多次凍融降低酶活性。

          我們推出了一套能全程保護RNA的酶解體系:DNase Max

          DNase Max:是一種可在室溫下穩定保存的高活性(1ul酶能在20分鐘內消化30ugDNA)DNA酶溶液。最強大的部分是清除DNA酶這一步。DNA酶和陽(yáng)離子被一種強特異性的樹(shù)脂吸附而從RNA樣品中清除,無(wú)需添加酶抑制劑或者加熱,終產(chǎn)物可直接用于qRT-PCR。與競爭性試劑盒比較,該樹(shù)脂非常高效,單次反應能完全去除10個(gè)單位DNA酶(如下圖,3-4泳道),而競爭試劑盒僅能去除2單位DNA酶(如下圖,1-2泳道)。

          這意味著(zhù)幾個(gè)小時(shí)的工作過(guò)程中你都能很好的保護你的珍貴RNA,最終得到更準確的基因表達分析結果。

          DNase Max去除樹(shù)脂完全去除DNA酶

          RNA樣品分別由DNase Max™ 試劑盒和競爭對手的試劑盒進(jìn)行DNA消化以及DNase去除。操作嚴格按照官方說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。通過(guò)MO BIO 的DNase-free認證辦法,對DNase殘留活性進(jìn)行分析。條帶5為陰性對照,不使用DNase。所有樣品37℃孵育1h,65℃ 5min滅活。1%瓊脂凝膠電泳展示如圖,DNase Max去除樹(shù)脂成功地去除掉所有DNase(條帶3-4),而競爭對手產(chǎn)品的樹(shù)脂并不能完全去除樣品中的所有DNase(條帶1-2)。

          保護RNA的其他產(chǎn)品

          無(wú)論什么來(lái)源的樣品,RNA的提取從來(lái)都是不容易的,尤其是樣品有限或者不可替代的時(shí)候。因為RNA不穩定,所以操作小心快速很關(guān)鍵。有很多方法可以在操作中保護起到RNA的作用,使你操作起來(lái)更加輕松而不必焦慮。

          用BME、均勻快速地研磨和使用帶清除樹(shù)脂并且經(jīng)認證不含RNA酶的DNA酶將成為你成功提取任意樣品RNA的小技巧。此外,要去除工作臺和設備上的核酸酶,應用實(shí)驗室清潔噴霧(12095)十分有效,經(jīng)認證不含RNA酶的手套(1556)的使用也能提供極大的幫助,在我們的實(shí)驗室,這些都是必不可少的。

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