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          沒有IRT的DNA會很臟

          來源:深圳市安必勝科技有限公司 轉載請注明出處【字號:

          很多研究者因樣品DNA很臟,轉而求助于我們。問題樣品主要集中在土壤、糞便和血液。樣品富含腐植酸、多糖類、亞鐵血紅素和色素等,與DNA交聯嚴重抑制下游PCR擴增等酶實驗和測序。MO BIO擁有一項專利抑制因子去除技術® (IRT),應用在多款試劑盒上能高效去除抑制因子卻極少影響DNA得率。這項技術真的有用嗎?負責任的研究者需要看到實驗數據。最近我們接到下面的一個問題:

          Q:你們有使用與不使用抑制因子去除技術® (IRT)提取DNA的質量對比數據嗎?

          答案是有的。我們已經做了一系列的質量評估工作,證明了提取環境樣品DNA的過程中使用IRT技術的重要性。一篇總結性文章曾發表于ASM 2010年年會(可致電:0755-8348 9872索。。使用含IRT技術的MO BIO PowerSoil® DNA Isolation Kit,與不含IRT技術的競爭品牌試劑盒,提取0.1g堆肥做對比試驗。最終DNA用分光光度法和凝膠電泳分析作初步分析,然后用通用引物16S rRNA,KAPA2G Fast HotStart Readymix酶跑end-point PCR。下圖(圖3A)展示DNA純度曲線和凝膠電泳結果。圖3B展示最終DNA的吸光值。值得注意的是,競爭對手試劑盒提取的DNA A260讀數較高,表面上看起來得率是PowerSoil® Kit(P)的兩倍,然而進一步的凝膠電泳能看到多出部分的DNA源于大量腐植酸污染(低230/260比值加上高340讀數,圖3B),以及回收的大量降解RNA(圖3A)。后面的PCR擴增再次確認存在抑制因子。

          再來一個實驗對比我們的兩款試劑盒效果;一款含IRT技術(PowerWater® ),另一款不含IRT技術(RapidWater® )。

           



          除了IRT技術,其它都一樣。圖4A展示最終DNA得率差不多,而使用IRT技術的DNA Real-time PCR結果Cq

          值更低和劃一。

           

           

           

           

           

           

           

           

           

           

           

           

           

           

           

           

           

           

           

          光肉眼是看不出DNA臟與不臟的!就這個水樣DNA來說,盡管分光光度法測純度表明很干凈,結果qPCR結果還是非常不能令人滿意。

          雖然不是說有的樣品像這個水樣一樣棘手,但是無論你做的是什么類型樣品,MO BIO總有方法提取它。有了IRT技術,擴增成功率更有保障!

          MO BIO的DNA和RNA提取試劑盒中,下列產品使用了IRT技術: PowerBiofilm™、 PowerSoil® 、PowerMax® 、PowerPlant® Pro、PowerClean® 、PowerWater® 、PowerFood® BiOstic® Bacteremia DNA Isolation Kit。

          更多


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